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追求合作共贏
Win win for you and me售前售中售后完整的服務(wù)體系
誠信經(jīng)營質(zhì)量保障價格合理服務(wù)完善一、操作前準(zhǔn)備：保障實驗基礎(chǔ)
1. 環(huán)境與設(shè)備校驗
環(huán)境要求 ：
溫度：15-30℃（恒定±1℃）
濕度：≤80%
遠(yuǎn)離震動源（如離心機(jī)、搖床）
開機(jī)校驗 ：
啟動后執(zhí)行自動光學(xué)校準(zhǔn) （≥30分鐘預(yù)熱）
使用標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)板驗證孔間信號一致性（CV值＜5%）
2. 耗材與試劑選擇
專用耗材 ：
僅使用原廠認(rèn)證96孔板 （如MicroAmp™ Optical Plate）
匹配光學(xué)級封膜 （防止蒸發(fā)與透光干擾）
試劑規(guī)范 ：
預(yù)混試劑提前解凍（冰上操作），避免反復(fù)凍融
反應(yīng)體系推薦：20-50μL （低體積需校準(zhǔn)加樣精度）
二、標(biāo)準(zhǔn)化操作流程
Step 1 實驗設(shè)計與軟件設(shè)置
創(chuàng)建新程序：
命名實驗（例：靶標(biāo)分子_202405）
選擇檢測通道（FAM/VIC/ROX等，支持5通道同步）
設(shè)置反應(yīng)程序：
| 步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10 min | 1 |
| 擴(kuò)增 | 95℃→60℃ | 15 sec→1 min | 40 |
| 熔解曲線 | 95℃→60℃ | 15 sec→1 min | 1 |
Step 2 加樣與上機(jī)
分區(qū)操作防污染 ：
試劑配制區(qū)（潔凈臺） → 樣本處理區(qū)（生物安全柜） → 擴(kuò)增分析區(qū)（獨立空間）
反應(yīng)體系構(gòu)建：
模板DNA：≤100 ng/孔
引物/探針：按預(yù)混試劑說明書濃度添加
推薦體系：
預(yù)混試劑 10 μL + 引物探針 2 μL + 模板 3 μL + ddH?O 5 μL
上機(jī)操作：
孔板輕震離心（避免氣泡）
按A1→H12順序 放置，確保孔位與軟件匹配
Step 3 運行監(jiān)控與數(shù)據(jù)分析
實時監(jiān)控：
軟件界面查看擴(kuò)增曲線 與熒光閾值（ΔRn）
異常孔位標(biāo)記（如信號跳躍、無擴(kuò)增）
結(jié)果解讀：
Ct值判定 ：閾值線設(shè)定在指數(shù)擴(kuò)增期（建議自動計算）
熔解曲線 ：單峰=特異性擴(kuò)增，多峰=引物二聚體
三、關(guān)鍵注意事項與排障方案
| 問題現(xiàn)象 | 原因分析 | 解決方案 |
| 孔間信號差異＞10% | 孔板透光不均 | 更換原廠認(rèn)證耗材 |
| 擴(kuò)增曲線呈鋸齒狀 | 反應(yīng)體系氣泡或污染 | 離心后重新上機(jī)；更換試劑 |
| ROX校正失敗 | 光學(xué)模塊污染 | 執(zhí)行深度校準(zhǔn)程序并清潔樣品槽 |
| 溫度控制超差±0.5℃ | 散熱口堵塞 | 清理濾網(wǎng)，確保通風(fēng) |
四、日常維護(hù)與校準(zhǔn)
每周維護(hù) ：
用無絨布蘸70%乙醇清潔樣品槽
檢查散熱濾網(wǎng)（積塵降低制冷效率）
五、安全與合規(guī)聲明
本操作需在BSL-1級實驗室 環(huán)境下進(jìn)行：
穿戴實驗服、手套及護(hù)目鏡
廢棄耗材按《實驗室生物安全手冊》分類處置
設(shè)備僅用于科研與質(zhì)檢用途
